这篇文章展示了靶蛋白GSPT1、E3连接酶CRBN-DDB1、分子胶X和来那度胺（对照）的一些研究数据。利用FIDA技术，能够快速准确地测定三元复合物的形成，并提供复合物的大小（Rh）、亲和力常数（KD）、协同性（α）和结合比例等丰富的数据。
GSPT1、E3酶CRBN-DDB1、分子胶X
软件显示和分析三元复合物的形成（详见正文）
软件快速分析可得:复合物大小(Rh) ，亲和力 (Kd)，协同性 (α)，结合比例
实验方法
Fida1设备外观，自动进样器图示
GSPT1用DY-490标记作为带荧光的指示剂（indicator）。
实验在Fida 1仪器上进行：480 nm LED检测器 、高灵敏度涂层毛细管(Fida Biosystems)。工作缓冲液：20mM HEPES、20mM NaCl、1 mM TCEP、0.2 M EDTA、1% DMSO、0.05 % Pluronic F127，pH 8.0。
流动诱导分散分析（FIDA）用4μL的分析物(分子胶+CRBN-DDB1)充满毛细管，接着注入39nL的指示剂(GSPT1-DY490+分子胶+CRBN-DDB1)。
实验耗材图示：小安培瓶，96孔板；毛细管。
结果
GSPT1, MOL GLUE 和 CRBN-DDB1形成的三元复合物
最左侧数据点，未结合的GSPT1大小为4.27（±0.06）nm。固定CRBN-DDB1的浓度为100 nM，以分子胶Glue X做浓度梯度滴定，生成了一个S型的结合曲线，显示了三元复合物的形成，总亲和力为11.1 nM。对照：相同条件固定CRBN-DDB1的浓度，以来那度胺做浓度梯度滴定，GSPT1的大小没有增加，显示没有三元复合物形成。
三元复合物分析的集成软件
在软件中通过拟合实验数据来确定参数:-Kd 1 (GSPT1和分子胶的亲和力)-Kd 2 (CRBN-DDB1和分子胶的亲和力)-协同性 (α)-指示剂 (GSPT1)大小(Rh)-二元复合物 (GSPT1- 分子胶)大小(Rh)-三元复合物 (GSPT1- 分子胶-CRBN-DDB1)大小(Rh)
利用BRIC信号表征二元复合物
BRIC，Binding Related Intensity Change：结合相关荧光强度变化。
除了流体力学半径(Rh)参数之外， Fida 1 还提供一种固有荧光强度的正交测量：当结合发生在荧光标记附近时，构象和溶剂暴露等变化会导致荧光强度的改变。图中显示了在5nM CRBN-DDB1存在时，GSPT1-DY490(25nM)的BRIC信号与分子胶浓度变化的关系。结合曲线由BRIC信号来反映GSPT1与分子胶X的相互作用，由此得到表观亲和力为0.2 nM。
结论
本研究表明，Fida 1仪器是一种易于使用的生物分析平台，通过正交测量分子大小和BRIC信号，在溶液中表征三元复合物的形成。
FDIA分别提供了分子胶X和靶蛋白、蛋白酶相互作用的数据。将实验数据和Fidabio三元复合物形成的数学模型进行拟合，可以得到一个大数据集，包涵丰富的数据 (KD、α、二元复合物大小、三元复合物大小等等)。
还有一项未展示的Fida 1软件功能是与蛋白数据库（PDB）进行关联，可以将数据库中的蛋白粒径或预测出的粒径（Rh），与Fida 1在溶液中蛋白自然状态下测量的数据进行比较验证。